價(jià) 格：詢價(jià)
規(guī) 格：25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L
產(chǎn) 地：中國
貨 號：HS060202001L
品 牌：匯研生物
為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細(xì)閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
Phenyl Focurose HP偶聯(lián)的疏水性配基在高離子強(qiáng)度條件下（高離子強(qiáng)度會增加配基和疏水性基團(tuán)的相互作用）可以與蛋白質(zhì)或抗體表面的一些疏水性基團(tuán)進(jìn)行相互作用，從而達(dá)到分離純化的目的。Phenyl Focurose HP 主要用于中度純化和精細(xì)純化。
預(yù)裝柱需聯(lián)合層析系統(tǒng)或蠕動泵或注射器使用。
特點(diǎn)：
a.快速、簡單（一步純化）。
b.與反相層析相比，疏水作用層析介質(zhì)上的配基濃度低，洗脫條件溫和，有助于保持分子的生物活性。
c.應(yīng)用廣，可以單獨(dú)中度純化和精細(xì)純化，又可以和離子交換介質(zhì)組合使用。
d.高分辨率。
表1：性能參數(shù)
基質(zhì) | 高度交聯(lián)6%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 25-45μm |
平均粒徑 | 35±5μm |
配基濃度 | 25umol/ml（介質(zhì)） |
pH穩(wěn)定性 | 2-14（短期） 3-13（長期） |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 所有常用緩沖溶液，1M乙酸、1M氫氧化鈉、8M尿素、6M鹽酸胍、30%異丙醇、70%乙醇 |
流速 | ≥150cm/h |
貯存溶液 | 20% 乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
表2：影響疏水層析的因素
影響因素 | 作用機(jī)理 | 處理建議 |
配基結(jié)構(gòu) | 不同的配基與蛋白的結(jié)合能力強(qiáng)弱不同 | 建議預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選合適的介質(zhì) |
配基濃度 | 配基濃度越高結(jié)合能力越強(qiáng) | 建議預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇最優(yōu)配基濃度 |
樣品性質(zhì) | 蛋白質(zhì)的疏水性強(qiáng)弱取決于其表面疏水基團(tuán)的分布 | / |
鹽的濃度 | 鹽濃度越高，配基和蛋白質(zhì)結(jié)合的越牢固，但過高的鹽濃度會導(dǎo)致蛋白沉淀 | 檢測不同鹽濃度下蛋白的溶解性和穩(wěn)定性 |
鹽的種類 | 不同類型的鹽會產(chǎn)生不同的結(jié)合效果 | 優(yōu)先選擇(NH4)2SO4和NaCl |
溫度 | 溫度越高，蛋白疏水性越強(qiáng) | 必須要維持同樣的溫度，建議維持室溫 |
pH | 過高的或過低的pH會影響蛋白質(zhì)的溶解性和穩(wěn)定性，并且pH會影響結(jié)合效果 | 在保證蛋白的溶解性和穩(wěn)定的前提下，建議pH范圍在5.0-8.5 |
2.溶液制備
平衡液：0.05M PB、1.70M (NH4)2SO4，pH 7.0。
洗脫液：0.05M PB，pH 7.0。
3.樣品制備
3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進(jìn)行稀釋、透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。
3.2樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4.純化流程（以XK16/10為例）
采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗5CV（CV指柱床體積，下同）。
用洗脫液以5ml/min的流速沖洗5CV。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。
將樣品以5ml/min的流速上樣。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。
用洗脫液以5ml/min洗脫5CV或20CV(根據(jù)前期篩選實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。
用純化水以5ml/min的流速沖洗5CV。
5.放大
保持柱床高度不變
5.2 保持線性流速不變
備注：若實(shí)際情況和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)有偏差，可以維持停留時(shí)間不變。
6.維護(hù)
6.1平衡
柱子裝填完成后，用平衡液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。
6.2再生
每次分離純化后，用純化水以60cm/h的流速沖洗5CV。
6.3在位清洗
在位清洗用于清洗再生沒有清洗干凈的物質(zhì)，例如脂類、沉淀物、變性蛋白。
a.沉淀物
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
b.脂類、強(qiáng)疏水蛋白。
用1.0M NaOH，30%異丙醇以30cm/h的流速反向沖洗5CV
6.4消毒
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
6.5滅菌
將介質(zhì)置換到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中進(jìn)行高壓滅菌。
6.6保存
介質(zhì)在20%乙醇中4-30℃保存。
7.常見問題
表3：常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合 或結(jié)合量較低 | 1.上樣量過載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過快 | 降低上樣流速 | |
3.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì) | |
4.平衡液中鹽濃度較低或目標(biāo)物疏水性較弱 | 加大平衡液中鹽濃度或更換鹽的種類或更換結(jié)合能力更強(qiáng)的疏水介質(zhì) | |
洗脫時(shí)沒有收集到目標(biāo)物 或只收集到少量目標(biāo)物 | 1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少 | 先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合 |
2.洗脫時(shí)間不夠 | 降低流速，延長洗脫液的保留時(shí)間 | |
3.洗脫體積過小 | 加大洗脫體積 | |
4.目標(biāo)物和介質(zhì)結(jié)合強(qiáng)度太高 | 降低平衡液中鹽濃度或更換鹽的種類或或更換結(jié)合能力較弱的疏水介質(zhì)在洗脫液中加入添加劑（少量去污劑或者低濃度有機(jī)試劑） | |
目標(biāo)物純度較低
| 1.樣品沒有經(jīng)過前處理 | 樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾 |
2.樣品粘度過高 | 用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?，降低粘度?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì) | |
5.洗脫條件不佳，洗脫流速太快、梯度太陡。 | 優(yōu)化洗脫條件 | |
6.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購買 | |
7.分離柱頂部有較大儲樣體積 | 重新裝柱或降低儲樣體積 | |
8.介質(zhì)選擇性不合適 | 篩選合適的疏水介質(zhì) | |
9.介質(zhì)中有微生物生長 | 介質(zhì)使用完后，請及時(shí)正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過快 | 降低上樣流速 |
2.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。 | 及時(shí)清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過多，配基被氧化或脫落 | 及時(shí)清洗介質(zhì)或更換新介質(zhì) | |
色譜峰上升過陡 | 介質(zhì)裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜 |
2.目標(biāo)物沉淀在介質(zhì)中 | 調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性 | |
3.分離柱中微生物生長 | 所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣、樣品上柱前必須離心或過濾 |
8.訂購信息
表4：訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
Phenyl Focurose HP | 25ml | HS060202025M |
Phenyl Focurose HP | 100ml | HS060202100M |
Phenyl Focurose HP | 500ml | HS060202500M |
Phenyl Focurose HP | 1L | HS060202001L |
Phenyl Focurose HP | 5L | HS060202005L |
Phenyl Focurose HP | 20L | HS060202020L |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買，請咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
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