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產(chǎn)品展示

CNBr Focurose 4FF

價 格:詢價

規(guī) 格:5ml/25ml/100ml/500ml

產(chǎn) 地:中國

貨 號:HQ030301001L

品 牌:匯研生物


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產(chǎn)品概述

  為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作,使用前請仔細(xì)閱讀本手冊,有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員(聯(lián)系方式見附錄)。

 

1.產(chǎn)品介紹

CNBr Focurose 4FF是經(jīng)過溴化氰活化后含有氰酸酯基團(tuán)的快流速純化介質(zhì),適用于偶聯(lián)蛋白質(zhì)、多肽、核酸等含有氨基的生物分子。在生物醫(yī)藥純化工藝中經(jīng)過反復(fù)的驗(yàn)證,得到了廣泛的應(yīng)用。

特點(diǎn):

a.應(yīng)用廣泛,可適用于偶聯(lián)含氨基的生物類大分子。

b.多點(diǎn)偶聯(lián),簡單、靈活、快速、有效,能高效的維持生物分子的生物學(xué)活性及穩(wěn)定性。

c.流速快、產(chǎn)率高、易于放大。

 

表1:介質(zhì)性能參數(shù)

基質(zhì)

高度交聯(lián)4%的瓊脂糖

粒徑范圍

45-165μm

平均粒徑

90±5μm

結(jié)合載量

25-40mg(Trypsinogen)/ml(介質(zhì))

pH穩(wěn)定性*

3-11(長期) 2-11(短期)

流速

≧250cm/h

操作壓力

≤0.3MPa

貯存溶液

100%丙酮

貯存溫度

4-8℃

*:穩(wěn)定性取決于偶聯(lián)的配基


2.溶液制備

A液:0.001M HCl。

B液:0.1M NaHCO3、0.5M NaCl,pH 8.3。

C液:0.1M Tris-HCl,pH 8.0。

D液:0.1M Tris-HCl、0.5M NaCl,pH 9.0。

E液:0.1M 乙酸鈉、0.5M NaCl,pH 3.0。

F液:20%乙醇。

G液:0.02M Na2HPO4、0.5M NaCl, pH 7.0-7.4。

H液:0.1M Glycine-HCl,pH 2.7。

I液:1.0M Tris-HCl,pH 9.0。

 

3.樣品制備

3.1按0.5-10mg/ml的濃度將待偶聯(lián)樣品溶解在B液中,也可以采用透析/超濾/G25將待偶聯(lián)樣品置換到B液中。

3.2樣品過濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過濾;平均粒徑>165μm,用   0.8μm過濾)。

 

4.偶聯(lián)流程

4.1取所需量的介質(zhì)勻漿液至相應(yīng)規(guī)格的砂芯漏斗中抽干。

4.2加入2倍介質(zhì)體積的預(yù)冷A液,攪拌均勻后抽干;重復(fù)2次。

4.3將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)規(guī)格的反應(yīng)器中。

4.4將待偶聯(lián)樣品加入到反應(yīng)器中,室溫條件下溫和攪拌約4h。

4.5將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干,保存收集容器中偶聯(lián)后的溶液。

4.6加入2倍介質(zhì)體積的C液,攪拌均勻后抽干;重復(fù)2次。

4.7將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)規(guī)格的反應(yīng)器中, 加入2倍介質(zhì)體積的C液, 室溫條件下溫和攪拌約4h。

4.8將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干。

4.9加入2倍介質(zhì)體積的D液, 攪拌均勻后抽干。

4.10加入2倍介質(zhì)體積的E液, 攪拌均勻后抽干。

4.11重復(fù)“4.9-4.10”2次。

4.12加入2倍介質(zhì)體積的F液, 攪拌均勻后抽干;重復(fù)2次。

4.13將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)規(guī)格的容器中,加入等體積的F液后保存?zhèn)溆谩?/span>

 

5.偶聯(lián)效率測定

測定偶聯(lián)前后溶液中樣品含量(A280),計(jì)算偶聯(lián)效率。

 

6.純化流程(以XK16/10為例)

6.1采用液滴對液滴(避免引入氣泡)的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。

6.2用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

6.3用G液以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.4將樣品以5ml/min的流速上樣。

6.5用G液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)(10-15個CV)。

6.6用H液以5ml/min的流速洗脫10CV。

6.7用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

6.8用F液以5ml/min的流速沖洗5個CV。

 

7.清洗(取決于待偶聯(lián)樣品的穩(wěn)定性)

7.1用6M鹽酸胍沖洗10CV,立即用純化水沖洗10CV。

7.2用70%乙醇沖洗10CV,立即用純化水沖洗10CV。

7.3用F液沖洗10CV。

 

8.常見問題

表2:常見問題及解決方案

問題

可能原因

解決方案

偶聯(lián)效率較低

1.B液鹽濃度或pH不對

檢測B液配制是否正確

2.偶聯(lián)時間不夠

延長偶聯(lián)時間

3.預(yù)活化填料不合適

嘗試其它種類的預(yù)活化填料

純化時目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合

或結(jié)合量較低

1.上樣量過載

降低上樣量

2.上樣流速過快

降低上樣流速

3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集

及時有效地清洗介質(zhì)

4.樣品在儲存或上樣過程中失活

正確儲存待純化樣品以維持樣品的活性

5.配基和目標(biāo)物結(jié)合比例比較低

嘗試加大偶聯(lián)時配基濃度

6.配基在偶聯(lián)或清洗過程中降解

檢測配基在偶聯(lián)或清洗中的穩(wěn)定性

洗脫時沒有收集到目標(biāo)物

或只收集到少量目標(biāo)物

1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少

降低上樣流速并檢查介質(zhì)的結(jié)合能力

2.洗脫條件不合適

更改相應(yīng)洗脫條件或增強(qiáng)洗脫液的洗脫能力

3.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀

檢測目標(biāo)物在洗脫液條件(鹽濃度和pH等)下的穩(wěn)定性

目標(biāo)物純度較低

 

1.樣品沒有經(jīng)過前處理

樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾

2.樣品粘度過高

用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠罚档驼扯取?/span>

3.洗雜不徹底

加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致

4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀

及時有效地清洗介質(zhì)

5.洗脫條件不佳,洗脫流速太快、梯度太陡。

優(yōu)化洗脫條件

6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解

檢測目標(biāo)物的穩(wěn)定性

7.柱料裝填效果不佳

重新裝填或購買

8.雜質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附

適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附

9.分離柱頂部有較大儲樣體積

重新裝柱或降低儲樣體積

10.介質(zhì)中有微生物生長

介質(zhì)使用完后,請及時正確保存介質(zhì)

介質(zhì)載量下降

1.上樣流速過快

降低上樣流速

2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集,導(dǎo)致載量下降。

及時清洗介質(zhì)

3.使用次數(shù)過多,配基出現(xiàn)脫落

重新偶聯(lián)新的介質(zhì)

4.樣品在儲存或上樣過程中失活,不能較好的與配基結(jié)合

正確儲存待純化樣品以維持樣品的活性

色譜峰上升過陡

介質(zhì)裝填過緊

重新裝柱

色譜峰上升過緩或拖尾

介質(zhì)裝填太松

重新裝柱

柱床有裂縫或干涸

出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入

檢查管路是否有泄露或氣泡,重新裝柱

液流較慢

 

1.蛋白或脂類聚集

及時清洗介質(zhì)或?yàn)V膜

2.蛋白沉淀在介質(zhì)中

調(diào)整平衡液和洗脫液組分,以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率

3.分離柱中微生物生長

所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣;

樣品上柱前必須離心或過濾

 

9.訂購信息

表3:訂購信息表

產(chǎn)品

規(guī)格

貨號

CNBr Focurose 4FF

5ml

HQ03030105M

CNBr Focurose 4FF

25ml

HQ030301025M

CNBr Focurose 4FF

100ml

HQ030301100M

CNBr Focurose 4FF

500ml

HQ030301500M

備注:大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買,請咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。


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CNBr Focurose 4FF

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