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產(chǎn)品展示

GST Focurose 4FF

價(jià) 格:詢(xún)價(jià)

規(guī) 格:25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L

產(chǎn) 地:中國(guó)

貨 號(hào):HQ030307001L

品 牌:匯研生物


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產(chǎn)品概述

   為確保產(chǎn)品的性能和無(wú)憂(yōu)的操作,使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本手冊(cè),有任何疑問(wèn)請(qǐng)咨詢(xún)本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N(xiāo)售人員(聯(lián)系方式見(jiàn)附錄)。

 

1.產(chǎn)品介紹

GST Focurose 4FF適用于分離純化GST標(biāo)簽蛋白、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶或谷胱甘肽依賴(lài)性蛋白。

特點(diǎn):

a.快速、簡(jiǎn)單(一步純化)。

b.載量高、流速快、易于放大。

c.溫和的洗脫條件可以完整的保留蛋白的生物學(xué)活性。

 

表1:介質(zhì)性能參數(shù)

基質(zhì)

高度交聯(lián)4%的瓊脂糖

粒徑范圍

45-165μm

平均粒徑

90±5μm

結(jié)合載量

>10mg(GST標(biāo)簽蛋白)/ml(介質(zhì))

pH穩(wěn)定性

3-12

化學(xué)穩(wěn)定性

所有常用水溶液,如:1M醋酸鹽,pH 4.0、0.1M NaOH、70%乙醇、8M尿素、6M 鹽酸胍。

流速

≧250cm/h

操作壓力

≤0.3MPa

貯存溶液

20%乙醇

貯存溫度

4-30℃

 

2.溶液制備

平衡液:0.14M NaCl、0.0027M KCl、0.01M Na2HPO4、0.0018M KH2PO4,pH 7.3。

洗脫液:0.05M Tris-HCl、0.01M GSH,pH 8.0

 

3.樣品制備

3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液進(jìn)行裂解、透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。

3.2樣品過(guò)濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過(guò)濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過(guò)濾;平均粒徑>165μm,用   0.8μm過(guò)濾)。

 

4.純化流程(以XK16/10為例)

4.1采用液滴對(duì)液滴(避免引入氣泡)的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。

4.2用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

4.3用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

4.4將樣品以1ml/min的流速上樣。

4.5用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗至紫外吸收值平穩(wěn)(10-15個(gè)CV)。

4.6用洗脫液以5ml/min的流速洗脫10CV。

 

5.放大

保持柱床高度不變

5.2 保持線(xiàn)性流速不變

備注:若實(shí)際情況和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)有偏差,可以維持停留時(shí)間不變。

 

6.清洗

清洗后可以去除一些強(qiáng)結(jié)合性物質(zhì)(例如一些強(qiáng)結(jié)合的蛋白、變性蛋白、脂類(lèi)等),從而達(dá)到恢復(fù)介質(zhì)的優(yōu)良性能(例如載量、流動(dòng)性、柱效等)。

建議每使用5次后進(jìn)行一次清洗,具體清洗頻率需根據(jù)純化的初始樣品的潔凈度進(jìn)行調(diào)整。

6.1 用5CV 1.0%Triton X-100或70%乙醇沖洗后,立即用10CV純化水沖洗。

備注:用于去除疏水結(jié)合物質(zhì)。

6.2 用5CV 8M尿素或6M鹽酸胍沖洗后,立即用10CV純化水沖洗。

備注:用于去除聚集在介質(zhì)中的沉淀或變性物質(zhì)。

6.3 用10CV的20%乙醇沖洗后保存。

備注:20%乙醇可以防止微生物的生長(zhǎng),20%乙醇保存的介質(zhì)可以在4-30℃(4-8℃更佳)保存。

 

7.常見(jiàn)問(wèn)題

表2:常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

問(wèn)題

可能原因

解決方案

純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合

或結(jié)合量較低

1.上樣量過(guò)載

降低上樣量

2.上樣流速過(guò)快

降低上樣流速

3.蛋白或脂類(lèi)在介質(zhì)中聚集

及時(shí)有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì)

4.樣品在超聲裂解過(guò)程中失活

采用較為溫和的條件進(jìn)行超聲裂解

5.樣本或平衡液中pH不在正確的范圍

保證樣本和平衡液pH在6.5-8.0以?xún)?nèi)

6.表達(dá)條件過(guò)于劇烈,目標(biāo)物構(gòu)象發(fā)生改變,不能與介質(zhì)結(jié)合

建議做一個(gè)空載體作為表達(dá)和純化的對(duì)照

7.目標(biāo)物質(zhì)發(fā)生聚集

在裂解前加入1-10mM DTT

洗脫時(shí)沒(méi)有收集到目標(biāo)物

或只收集到少量目標(biāo)物

1.目標(biāo)物沒(méi)有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少

先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合

2.洗脫條件不合適

加大GSH濃度到20-40mM,并保證洗脫液pH在8.0-9.0以?xún)?nèi)

3.洗脫時(shí)間不夠

降低流速,延長(zhǎng)洗脫液的保留時(shí)間

4.洗脫體積過(guò)小

加大洗脫體積

5.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀

檢測(cè)目標(biāo)物在洗脫液條件(pH)下的溶解度和穩(wěn)定性。可以嘗試在洗脫液中加入一些添加劑:如0.1%Triton X-100或2%N-octyl glucoside

目標(biāo)物純度較低

 

1.樣品沒(méi)有經(jīng)過(guò)前處理

樣品上柱前必須要經(jīng)過(guò)離心或過(guò)濾

2.樣品粘度過(guò)高

用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?,降低粘度?/span>

3.洗雜不徹底

加大洗雜體積直至基線(xiàn)平穩(wěn)并與平衡液一致

4.雜質(zhì)蛋白或脂類(lèi)在介質(zhì)中聚集沉淀

及時(shí)有效地清洗介質(zhì)

5.洗脫條件不佳,洗脫流速太快、梯度太陡。

優(yōu)化洗脫條件

6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解

檢測(cè)目標(biāo)物的穩(wěn)定性

7.柱料裝填效果不佳

重新裝填或購(gòu)買(mǎi)

8.雜質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附

適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附

9.分離柱頂部有較大儲(chǔ)樣體積

重新裝柱或降低儲(chǔ)樣體積

10.介質(zhì)中有微生物生長(zhǎng)

介質(zhì)使用完后,請(qǐng)及時(shí)正確保存介質(zhì)

介質(zhì)載量下降

1.上樣流速過(guò)快

降低上樣流速

2.蛋白或脂類(lèi)在介質(zhì)中聚集,導(dǎo)致載量下降。

及時(shí)清洗介質(zhì)

3.使用次數(shù)過(guò)多,配基被氧化或脫落

及時(shí)清洗介質(zhì)或更換新介質(zhì)

4.樣品在超聲裂解或表達(dá)時(shí)構(gòu)象改變,不能較好的與配基結(jié)合

采用溫和的裂解方式或表達(dá)條件

色譜峰上升過(guò)陡

介質(zhì)裝填過(guò)緊

重新裝柱

色譜峰上升過(guò)緩或拖尾

介質(zhì)裝填太松

重新裝柱

柱床有裂縫或干涸

出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入

檢查管路是否有泄露或氣泡,重新裝柱

液流較慢

1.蛋白或脂類(lèi)聚集

及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜

2.蛋白沉淀在介質(zhì)中

調(diào)整平衡液和洗脫液組分,以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率

3.分離柱中微生物生長(zhǎng)

所用試劑必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾和脫氣;

樣品上柱前必須離心或過(guò)濾

 


8.訂購(gòu)信息

表3:訂購(gòu)信息表

產(chǎn)品

規(guī)格

貨號(hào)

GST Focurose 4FF

25ml

HQ030307025M

GST Focurose 4FF

100ml

HQ030307100M

GST Focurose 4FF

500ml

HQ030307500M

GST Focurose 4FF

1L

HQ030307001L

GST Focurose 4FF

5L

HQ030307005L

GST Focurose 4FF

20L

HQ030307020L

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