為確保產品的性能和無憂的操作，使用前請仔細閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術支持或當?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。
1.產品介紹
Focurose CL-4B適用于生物大分子物質的組分分離和中度純化（去除小分子雜質），例如：病毒顆粒、巨大分子蛋白、重組乙型肝炎表面抗原、多糖及大分子復合物。
特點：
a.高（理化）穩(wěn)定性、高回收率（可高達95%）。
b.溫和的洗脫條件可以完整的保留生物大分子生物學活性和功能。
c.易于維護。
表1：性能參數(shù)
介質 | 交聯(lián)4%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | ≈90μm |
分離范圍(球蛋白) | 60-20000kDa |
pH穩(wěn)定性 | 3-12（長期) 2-14（短期） |
化學穩(wěn)定性 | 0.5M氫氧化鈉、6M鹽酸胍、8M尿素 |
最大流速 | 25cm/h |
最大壓力 | 0.03MPa |
高溫高壓 | 水中121℃X20min |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
2.溶液制備
洗脫液：根據(jù)客戶需求進行配制。
備注：建議在目標溶液中加入一定濃度的鹽（至少0.025 M）用來抑制樣本和介質的離子作用。
3.樣品制備
3.1樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4.純化流程（以裝填XK 16/70的柱子為例 ）
4.1清洗
取140g的沉降介質，加入3倍體積的純化水重懸后用G3砂芯漏斗抽干，重復此步驟兩次。
4.2勻漿
將清洗完的抽干的介質用相同體積(≈140ml)的純化水進行重懸，用玻璃棒緩慢攪拌均勻。
4.3準備柱子
a.將柱管、下柱頭、適配器以及裝柱器用純化水沖洗干凈；
b.安裝下柱頭后擰緊密封圈；
c.注入3-5cm高的純化水；
d.擰下下堵頭，待排出所有氣泡后再擰上下堵頭；
e.安裝裝柱器，將層析柱垂直固定在層析系統(tǒng)附近。
4.4脫氣
將勻漿后的介質用真空泵或超聲清洗裝置進行脫氣。
4.5裝柱
a. 將脫氣后的介質用玻璃棒或其它攪拌裝置溫和攪拌均勻后，快速、連續(xù)加入（用玻璃棒引流，避免引入氣 泡）到層析柱中。
b. 快速用純化水將裝柱器上端填滿，并裝上裝柱器蓋。
c. 用管路連接層析系統(tǒng)和裝柱器后，擰下下堵頭，以3ml/min(90cm/h)的流速壓柱120min后暫停層析系統(tǒng)。
d. 擰上下堵頭，快速取下裝柱器，用純化水填滿柱管。
e. 將適配器連接層析系統(tǒng)，待管路中氣泡排盡后，將適配器稍微傾斜后插入柱管至介質界面上端0.5-1cm，擰緊密封圈。
f. 擰下下堵頭，以4ml/min(120cm/h)的流速壓柱10min后停止層析系統(tǒng)。
g. 標記介質界面刻度，將適配器壓至介質界面以下0.3cm。
4.6柱效檢測
a. 連接層析柱出口至層析系統(tǒng)，用純化水以0.66ml/min(20cm/h)的流速平衡2CV(柱體積)；
b. 用定量環(huán)或上樣泵注入1%CV的2%丙酮；
c. 以0.66ml/min(20cm/h)的流速運行1.5CV；
d. 計算HETP和As，HETP≤3h（h為平均粒徑）且0.7≤As≤1.3方為合格，否則重裝。
4.7使用
若柱效檢測合格可立即使用，以1ml/min(30cm/min)的流速用平衡液（平衡液中加入0.15M氯化鈉，抑制可能存在的非特異性吸附）平衡2CV后進行進樣（建議上樣體積≤2.5%CV）分離；若柱效檢測合格后，以1ml/min(30cm/min)的流速用保存液平衡2CV后保存。
5.清洗（以裝填XK 16/70的柱子為例 ）
5.1 用純化水以0.66ml/min（20cm/h）沖洗2個CV。
5.2 用1.0M NaOH以0.66ml/min（20cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.3 用純化水以0.66ml/min（20cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.4 用1.0M 乙酸以0.66ml/min（20cm/h）的流速沖洗2個CV。。
5.5 用純化水以0.66ml/min（20cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.6 用70%乙醇以0.66ml/min（20cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.7 用純化水以0.66ml/min（20cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.8 用20%乙醇以0.66ml/min（20cm/h）的流速沖洗2個CV。
6.消毒
6.1 用純化水以0.66ml/min（20cm/h）沖洗2個CV。
6.2 用1.0M NaOH以0.66ml/min（20cm/h）的流速反向沖洗2個CV。
6.3 用純化水以0.66ml/min（20cm/h）的流速沖洗2個CV。
6.4 用20%乙醇以0.66ml/min（20cm/h）的流速沖洗2個CV。
7.常見問題
表2：常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方法 |
色譜峰上升過陡 | 介質裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過緩或拖尾 | 介質裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
分離度差 | 1.選擇的介質不合適 | 確定選擇的介質是否合適 |
2.柱效差 | 測定柱效 | |
3.上樣量過大 | 優(yōu)化最佳的上樣量 | |
4.流速過快 | 優(yōu)化最佳的流速 | |
5.分離柱中微生物生長 | 更換介質 | |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時清洗介質或濾膜 |
2.蛋白沉淀在介質中 | 調整平衡液和洗脫液組分，以維持目標物的穩(wěn)定性和介質的結合效率 | |
3.分離柱中微生物生長 | 所用試劑必須經過過濾和脫氣，樣品上柱前必須離心或過濾 |
8.訂購信息
表3：訂購信息表
產品 | 規(guī)格 | 貨號 |
Focurose CL-4B | 25ml | HN030302025M |
Focurose CL-4B | 100ml | HN030302100M |
Focurose CL-4B | 500ml | HN030302500M |
Focurose CL-4B | 1L | HN030302001L |
Focurose CL-4B | 5L | HN030302005L |
Focurose CL-4B | 20L | HN030302020L |
備注：大規(guī)格包裝產品或其它產品購買，請咨詢本公司當?shù)劁N售或售前技術支持。
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